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एक उपयुक्त एलिसा प्लेट चुनना एक सफल एलिसा प्रयोग का पहला कदम है, लेकिन बहुत से लोग इसे अनदेखा कर देते हैं। जब लोग प्रयोग करते हैं, तो वे अक्सर केवल प्रयोग को ही मानते हैं, लेकिन यह नहीं जानते कि उत्पाद का अक्सर प्रयोग पर बहुत प्रभाव पड़ता है। उत्पादों का उचित चयन प्रयोग की सफलता में योगदान देगा। एलिसा प्रयोग करते समय हम आमतौर पर निम्नलिखित कारकों पर विचार करते हैं:
1. नीचे का आकार
वर्तमान में, निर्माता एंजाइम-लेबल वाले कुओं को स्वतंत्र स्तंभों के रूप में डिज़ाइन करते हैं, और कुओं के बीच की दूरी को उचित रूप से बढ़ाते हैं ताकि उन्हें स्वतंत्र रूप से अलग किया जा सके, जिससे क्रॉस-संदूषण कम से कम हो। विभिन्न प्रकार की एलिसा प्लेटों में कुएं के तल के विभिन्न आकार होते हैं। यहाँ कुछ सामान्य होल बॉटम आकार दिए गए हैं:
सपाट तल: तल क्षैतिज होता है, जिसे F तल भी कहा जाता है। प्रकाश नीचे से विक्षेपित नहीं होगा, जो प्रकाश को अधिकतम सीमा तक संचारित कर सकता है। उन प्रयोगों के लिए उपयोग करें जिनके लिए दृश्यता या अन्य कारणों से एक गोल तल की आवश्यकता होती है।
राउंड बॉटम: यू-बॉटम के रूप में भी जाना जाता है, सबसे अच्छा सफाई परिणाम और हाइब्रिड प्रदर्शन प्रदान करता है, जो उन अनुप्रयोगों के लिए उपयुक्त है जिन्हें तलछट का परीक्षण करने की आवश्यकता होती है।
सी-बॉटम: फ्लैट बॉटम के फायदों को मिलाते हुए, यह फ्लैट बॉटम और राउंड बॉटम के बीच एक अच्छा सफाई प्रभाव प्रदान कर सकता है।
कोन बॉटम: वी-बॉटम के रूप में भी जाना जाता है, यह सूक्ष्म नमूनों के सटीक नमूने और भंडारण के लिए उपयुक्त है ताकि छोटी मात्रा की इष्टतम वसूली हो सके।
2. एलिसा प्लेट का रंग
एलिसा प्लेट के तीन रंग हैं: पारदर्शी, काला और सफेद।
अधिकांश एलिसा प्रयोगात्मक सामग्री के रूप में पारदर्शी प्लेटों का चयन करती हैं। सफेद और काले एलिसा प्लेट आमतौर पर ल्यूमिनेसेंस डिटेक्शन के लिए उपयोग किए जाते हैं। काली एलिसा प्लेट स्वयं प्रकाश को अवशोषित करती है, इसलिए इसका संकेत सफेद एलिसा प्लेट की तुलना में कमजोर होता है। ब्लैक एलिसा प्लेट्स का उपयोग आमतौर पर मजबूत रोशनी का पता लगाने के लिए किया जाता है, जैसे कि फ्लोरोसेंस डिटेक्शन; इसके विपरीत, सफेद एलिसा प्लेटों का उपयोग कमजोर प्रकाश का पता लगाने के लिए किया जा सकता है, और अक्सर सामान्य रसायन विज्ञान और सब्सट्रेट रंग विकास (जैसे दोहरी लूसिफ़ेरेज़) के लिए उपयोग किया जाता है। रिपोर्टर जीन विश्लेषण)।
3. एलिसा प्लेट की सामग्री
सामान्य सामग्री पॉलीइथाइलीन (पीई), पॉलीप्रोपाइलीन (पीपी), पॉलीस्टाइनिन (पीएस), पॉलीविनाइल क्लोराइड (पीवीसी) और पॉली कार्बोनेट (पीसी) हैं।
ELSIA में सबसे व्यापक रूप से उपयोग की जाने वाली सामग्री पॉलीस्टाइनिन और पॉलीविनाइल क्लोराइड हैं। पॉलीविनाइल क्लोराइड सॉफ्ट बोर्ड पतला है, काटा जा सकता है, और कीमत कम है। नुकसान यह है कि खत्म पॉलीस्टायर्न बोर्ड जितना अच्छा नहीं है, और छेद के नीचे पॉलीस्टाइनिन जितना सपाट नहीं है। लेकिन संबंधित पृष्ठभूमि मूल्य में भी वृद्धि होगी। आमतौर पर, एलिसा प्लेट की सतह पर आयन ग्राफ्टिंग उपचार किया जाता है, और सक्रिय कार्यात्मक समूहों जैसे एल्डिहाइड समूह, अमीनो समूह और एपॉक्सी समूह को सब्सट्रेट सतह के प्रदर्शन को बेहतर बनाने के लिए बहुलक सतह में पेश किया जाता है।
4. विभिन्न बाध्यकारी तंत्र
प्लेट की निचली सतह पर कोटिंग सामग्री का कुशल बंधन एलिसा में एक महत्वपूर्ण कदम है। इसलिए, उपयुक्त एलिसा प्लेट का चयन करने के लिए प्रयोग से पहले लेपित किए जाने वाले पदार्थ की संरचनात्मक विशेषताओं और रासायनिक गुणों का सावधानीपूर्वक विश्लेषण किया जाना चाहिए। सामान्यतया, कोटिंग सामग्री को प्लेट के नीचे से बांधने के कई तरीके हैं: निष्क्रिय सोखना, सहसंयोजक बंधन और आत्मीयता पर कब्जा।
निष्क्रिय सोखना: निष्क्रिय सोखना का तंत्र जटिल है, और कोटिंग सामग्री और प्लेट के नीचे के बीच का बंधन मुख्य रूप से अंतर-आणविक बलों (वैन डेर वाल्स बल) और हाइड्रोजन बांड पर निर्भर करता है। अधिकांश एलिसा में, कोटिंग पदार्थ को प्लेट के नीचे से बांधना निष्क्रिय सोखना द्वारा पूरा किया जाता है। आम तौर पर, मध्यम और बड़े आणविक भार एंटीजन (या एंटीबॉडी) और प्लेट के नीचे के बीच बंधन निष्क्रिय सोखना द्वारा पूरा किया जाता है। एलिसा प्लेट का चयन करते समय प्लेट की निचली सतह की हाइड्रोफोबिक/हाइड्रोफिलिक विशेषताओं पर अक्सर विचार किया जाता है। निम्न तालिका विभिन्न हाइड्रोफिलिक सब्सट्रेट सतहों के आवेदन और उपयोग के दायरे को सूचीबद्ध करती है:
हाइड्रोफिलिक | प्राथमिकता बंधन | मुख्य उपयोग |
- | महत्वपूर्ण हाइड्रोफोबिक क्षेत्रों वाले अणु, जैसे: लिपिड, लिपोप्रोटीन, बड़े प्रोटीन | एंटीजन एलिसा, एफएलए, एलआईए |
प्लस | हाइड्रोफिलिक / हाइड्रोफोबिक गुणों वाले बायोमोलेक्यूल्स जैसे: मध्यम से बड़े प्रोटीन, इम्युनोग्लोबुलिन, एल्ब्यूमिन | डबल एंटीबॉडी सैंडविच एलिसा, एंटीजन एलिसा |
प्लस प्लस | हाइड्रोफिलिक / हाइड्रोफोबिक गुणों वाले बायोमोलेक्यूल्स जैसे: छोटे से बड़े प्रोटीन, इम्युनोग्लोबुलिन, एल्ब्यूमिन, एलपीएस, फॉस्फोराइलेटेड प्रोटीन, ग्लाइकोप्रोटीन | डबल एंटीबॉडी एलिसा, एफआईए, एलआईए |
प्लस प्लस प्लस | ग्लाइकोप्रोटीन, ध्रुवीय लिपिड अणु, फॉस्फोलिपिड, कार्डियोलिपिड | एंटीजन एलिसा |
एफ़िनिटी कैप्चर: एफ़िनिटी कैप्चर लेबल वाले मैक्रोमोलेक्यूल्स के उनके संबंधित रिसेप्टर्स के विशिष्ट बंधन पर आधारित है। टैग किए गए मैक्रोमोलेक्यूल्स या तो रासायनिक युग्मन या आनुवंशिक इंजीनियरिंग द्वारा प्राप्त किए जा सकते हैं।
एफ़िनिटी कैप्चर की विशेषताएं हैं:
1.उच्च विशिष्टता
2. माप परिणामों के सिग्नल-टू-शोर अनुपात में सुधार कर सकते हैं
अधिक सामान्य अच्छी तरह से नीचे की सतहें हैं: स्ट्रेप्टाविडिन (स्ट्रेप्टाविडिन) लेपित सतह; निकल केलेट (निकेल चेलेट) लेपित सतह और ग्लूटाथियोन (ग्लूटाथियोन, जीएसएच) लेपित सतह।
3. स्ट्रेप्टाविडिन सतह: स्ट्रेप्टाविडिन और बायोटिन की उच्च आत्मीयता और विशिष्टता का उपयोग नीचे की प्लेट को लेपित प्रोटीन के बंधन को महसूस करने के लिए किया जाता है।
4. निकल केलेट सतह: निकेल केलेट को उसके (हिस्टिडीन) टैग के साथ संलयन प्रोटीन को बांधने के लिए बहुलक सतह से जोड़ा जाता है।
5. ग्लूटाथियोन सतह: ग्लूटाथियोन और ग्लूटाथियोन सल्फ़हाइड्रीलट्रांसफेरेज़ (जीएसटी) के बीच एंजाइम और सब्सट्रेट विशिष्टता का उपयोग, नीचे की प्लेट को कोट प्रोटीन से बांधने के लिए।
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