सेल संस्कृति के लिए बुनियादी शर्तें
1. उपयुक्त सेल कल्चर माध्यम
इन विट्रो में कोशिका वृद्धि और प्रसार के लिए एक उपयुक्त सेल कल्चर माध्यम सबसे महत्वपूर्ण स्थितियों में से एक है। संस्कृति माध्यम न केवल कोशिका वृद्धि और प्रसार को बढ़ावा देने के लिए कोशिका पोषण और बुनियादी पदार्थ प्रदान करता है, बल्कि संवर्धित कोशिकाओं के विकास और प्रजनन के लिए एक जीवित वातावरण भी प्रदान करता है।
2. उच्च गुणवत्ता वाला सीरम
वर्तमान में, अधिकांश सिंथेटिक मीडिया को सीरम जोड़ने की आवश्यकता होती है। कोशिका संवर्धन माध्यम में सीरम सबसे महत्वपूर्ण घटकों में से एक है, जिसमें विभिन्न प्रकार के विकास कारक और कोशिका वृद्धि के लिए आवश्यक अन्य पोषक तत्व होते हैं।
3. लगातार कोशिका वृद्धि तापमान
सुसंस्कृत कोशिकाओं की जोरदार वृद्धि को बनाए रखने के लिए, एक स्थिर और उपयुक्त तापमान होना चाहिए।
4. उपयुक्त गैस वातावरण
स्तनधारी कोशिकाओं के अस्तित्व के लिए गैस आवश्यक शर्तों में से एक है, और आवश्यक गैसें मुख्य रूप से ऑक्सीजन और कार्बन डाइऑक्साइड हैं।
5. सेल संस्कृति तापमान
सुसंस्कृत कोशिकाओं की जोरदार वृद्धि को बनाए रखने के लिए, एक स्थिर और उपयुक्त तापमान होना चाहिए। विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं की संस्कृति तापमान के लिए अलग-अलग आवश्यकताएं होती हैं। मानव कोशिका संवर्धन के लिए मानक तापमान 36.5 डिग्री ± 0.5 डिग्री है। इस तापमान सीमा से विचलन कोशिकाओं के सामान्य चयापचय को प्रभावित करेगा और यहां तक कि मर भी जाएगा।
6. उपयुक्त गैस वातावरण
स्तनधारी कोशिका संवर्धन के अस्तित्व के लिए गैस आवश्यक शर्तों में से एक है, और आवश्यक गैसें मुख्य रूप से ऑक्सीजन और कार्बन डाइऑक्साइड हैं। ऑक्सीजन ट्राइकारबॉक्सिलिक एसिड चक्र में भाग लेता है, कोशिका वृद्धि और प्रसार के लिए ऊर्जा का उत्पादन करता है और कोशिका वृद्धि के लिए आवश्यक विभिन्न घटकों को संश्लेषित करता है।
सेल कल्चर का सामान्य संदूषण
1. जीवाणु संदूषण
जीवाणु संदूषण सबसे आम है। एक बार ऑपरेशन थोड़ा अनुचित हो जाने पर, यह सेल संदूषण का कारण बनेगा। जीवाणु संदूषण के बाद, सूक्ष्मदर्शी के नीचे देखे जाने पर यह रेत की काली पतली पट्टियों के रूप में दिखाई देगा। रॉड के आकार का, आदि। दूसरे, संस्कृति माध्यम पीला और मैला हो जाता है, और पेट्री डिश में महीन रेत के आकार का तलछट स्पष्ट रूप से देखा जा सकता है, और समय-समय पर एक अजीब गंध आती है।
2. फंगल संदूषण
फंगल-दूषित कल्चर सॉल्यूशन स्पष्ट और पारदर्शी होता है, बैक्टीरिया के संक्रमण के बड़े प्रकोप की तरह नहीं, इसलिए इसका जल्दी पता लगाना मुश्किल है। कभी यह सूक्ष्मदर्शी के नीचे एक फिलामेंट की तरह दिखता है, कभी यह मूंगा जैसा दिखता है, और धीरे-धीरे एक बहुत पतला काला फिलामेंट विकसित होगा। यह जब बहुत देर हो चुकी होती है, तो कोशिकाओं को बचाया जाना मुश्किल होता है।
3. मोल्ड संदूषण
कवक संक्रमणों के अनुरूप, क्योंकि संस्कृति माध्यम स्पष्ट है, कवक संदूषण का जल्दी पता लगाना मुश्किल होता है, जब अक्सर बहुत देर हो जाती है। फ्लोकुलेंट अशुद्धियां धीरे-धीरे संस्कृति माध्यम में दिखाई दीं, और सूक्ष्मदर्शी के नीचे फिलामेंटस द्रव्यमान तैरती वस्तुओं को हवा में कैटकिंस की तरह देखा जा सकता था। कोशिकाएं अभी भी विकसित हो सकती हैं, लेकिन समय के साथ, कोशिकाएं खराब हो जाती हैं और बढ़ना बंद हो जाती हैं।
4. माइकोप्लाज्मा संक्रमण
संस्कृति माध्यम अशांत हो जाता है। माइकोप्लाज्मा के कोशिकाओं को संक्रमित करने के बाद, साइटोपैथिक परिवर्तन स्पष्ट नहीं होते हैं, लेकिन कोशिका की स्थिति खराब हो जाती है और विकास धीमा हो जाता है। सूक्ष्मदर्शी के नीचे छोटे-छोटे काले धब्बे हो सकते हैं, लेकिन संस्कृति माध्यम आमतौर पर अशांत नहीं होता है। कोशिकाओं के पारित होने के बाद, अंतरकोशिकीय काले धब्बे दिखाई देते हैं, कोशिकाओं को रिक्त कर दिया जाता है, और कई कोशिकाएं एपोप्टोसिस और नेक्रोसिस जैसी दिखती हैं। आखिरकार, कोशिकाएं तैरने लगीं और पूरी तरह से मर गईं।
सेल संदूषण रोकथाम
सेल संदूषण को कम करने में अच्छे नियमों और विनियमों की स्थापना एक लंबा रास्ता तय कर सकती है। एक्सेस सिस्टम, ऑपरेटिंग मानदंड और दैनिक प्रबंधन प्रणाली सहित।
एक्सेस सिस्टम: कर्मियों और सामग्रियों सहित। कर्मियों को स्वयं संचालित करने से पहले उन्हें प्रशिक्षित करने की आवश्यकता होती है, और उन्हें प्रयोगशाला में प्रवेश करने से पहले पहनने की आवश्यकताओं को पूरा करना चाहिए, जैसे कि सफेद कोट, अलगाव गाउन, मास्क, दस्ताने आदि। आवश्यक वस्तुओं के लिए, गैर-डिस्पोजेबल वस्तुओं को सख्ती से होना चाहिए निष्फल और निष्फल, और खरीदी गई वस्तुओं को नियमित और विश्वसनीय चैनलों से खरीदा जाना चाहिए। नई खरीदी गई कोशिकाओं का उपयोग करने से पहले परीक्षण और सत्यापन किया जाना चाहिए।
ऑपरेटिंग विनिर्देश: नियमित संचालन के लिए विनिर्देशों को तैयार करना सबसे अच्छा है, और प्रयोगशाला कर्मियों को परिचालन विनिर्देशों का पालन करना चाहिए, जिन्हें इच्छानुसार बदला नहीं जा सकता है, और प्रयोगशाला कर्मियों के लिए अच्छी परिचालन आदतों को भी विकसित करना चाहिए। उदाहरण के लिए, पिपेट टिप चूसा जाने के बाद, इसे दूसरी बार माध्यम में नहीं बढ़ाया जाएगा, और पर्याप्त मात्रा में माध्यम एक बार चूसा जाएगा। तरल जोड़ते समय, तरल को यथासंभव निलंबन में जोड़ा जाना चाहिए, जो प्रभावी रूप से माइकोप्लाज्मा संदूषण और सेल क्रॉस-संदूषण को रोक सकता है। इसके अलावा, यदि संभव हो तो, एक समय में केवल एक सेल लाइन संचालित करें, और क्रॉस-संदूषण से बचने के लिए कोशिकाओं के बीच थोड़ा समय अंतराल होना बेहतर है।
दैनिक प्रबंधन प्रणाली: इसमें पर्यावरण और उपभोग्य सामग्रियों, अभिकर्मकों, आदि के उपयोग, सफाई और रखरखाव के लिए नियम और तरीके शामिल हैं। इसमें दो-स्तरीय इन्वेंट्री प्रबंधन सहित अभिकर्मकों और उपभोग्य सामग्रियों की खपत, सूची और खरीद का प्रबंधन भी शामिल है। सेल के नमूने। संदूषण स्रोतों के लिए जिन्हें ढूंढना आसान नहीं है, नियमित परीक्षण करना सबसे अच्छा है, मुख्य रूप से माइकोप्लाज्मा संदूषण और सेल क्रॉस-संदूषण।
बीकेएमएएम बायो सेल कल्चर के लिए संगत उपभोग्य वस्तुएं प्रदान करता है:
डिस्पोजेबल प्लास्टिक गोल/वर्ग पेट्री डिश:
उच्च पारदर्शिता पॉलीस्टाइनिन सामग्री (पीएस);
सतह चिकनी और सपाट है, और सूक्ष्मदर्शी अवलोकन के तहत कोशिकाओं का कोई ऑप्टिकल विरूपण नहीं है;
स्टैकिंग डिज़ाइन स्टैकिंग और स्टोरेज को आसान बनाता है;
एथिलीन ऑक्साइड नसबंदी (ईओ);
पहनने और संक्षारण प्रतिरोध।
सेल कल्चर व्यंजन का अनुयाई उपचार:
पॉलीस्टाइनिन सामग्री (पीएस);
इलेक्ट्रॉन बीम नसबंदी, कोई पाइरोजेन नहीं, कोई विष नहीं;
वैक्यूम प्लाज्मा सतह उपचार, उत्कृष्ट सेल आसंजन;
सतह चिकनी और सपाट है, और सूक्ष्मदर्शी अवलोकन के तहत कोशिकाओं का कोई ऑप्टिकल विरूपण नहीं है;
स्टैकेबल डिज़ाइन स्टैकिंग और स्टोरेज को आसान बनाता है।
प्लास्टिक सेल कल्चर प्लेट्स:
पॉलीस्टाइनिन सामग्री (पीएस);
सामान्य सेल संस्कृति, गैर-पक्षपाती उपचार प्लेट प्रकार के लिए उपयुक्त;
कोई पाइरोजेन नहीं, कोई विष नहीं, निष्फल;
आसान आंसू प्रकार स्वतंत्र पैकेजिंग, संचालित करने में आसान;
सेल कल्चर प्लेट्स का अनुयाई उपचार:
पॉलीस्टाइनिन सामग्री (पीएस);
अनुयाई उपचार (टीसी उपचार) प्लेट प्रकार, अनुयाई कोशिकाओं की संस्कृति के लिए उपयुक्त;
कोई पाइरोजेन नहीं, कोई विष नहीं, निष्फल;
आसान आंसू प्रकार स्वतंत्र पैकेजिंग, संचालित करने में आसान;
सभी फ्लैट बॉटम हैं।
सेल कल्चर फ्लास्क का अनुयाई उपचार:
पॉलीस्टाइनिन सामग्री (पीएस);
इलेक्ट्रॉन बीम नसबंदी, कोई पाइरोजेन नहीं, कोई विष नहीं;
वैक्यूम प्लाज्मा सतह उपचार, उत्कृष्ट सेल आसंजन;
सांस लेने योग्य आवरण, जो गैस विनिमय के लिए अनुकूल है और सूक्ष्मजीवों को गुजरने से रोकता है।
आंतरिक/बाहरी स्पिन क्रायोविअल्स:
100 प्रतिशत शुद्ध पॉलीप्रोपाइलीन सामग्री (पीपी);
15psi, 121 डिग्री नसबंदी का सामना कर सकते हैं;
ट्यूब की दीवार मोटी हो जाती है, और ट्यूब बॉडी में स्केल और लेखन क्षेत्र होता है;
जकड़न सुनिश्चित करने के लिए पाइप कवर थ्रेड और पाइप बॉडी के बीच एक सिलिकॉन रिंग सील है;
कोई DNase नहीं, कोई RNase नहीं, कोई पाइरोजेन नहीं, कोई एंडोटॉक्सिन नहीं।
