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सूक्ष्मजीव छोटे जीवों का एक समूह है जो प्रकृति में व्यापक रूप से मौजूद हैं और नग्न आंखों के लिए अदृश्य हैं और उन्हें ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप या इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप की मदद से सैकड़ों, हजारों या यहां तक कि दसियों हजार बार आवर्धित किया जाना चाहिए। उनके पास छोटे आकार, सरल संरचना, तेजी से प्रजनन, आसान भिन्नता और पर्यावरण के अनुकूल होने की मजबूत क्षमता के फायदे हैं।
सूक्ष्मजीवों का वर्गीकरण:
सूक्ष्मजीव कई प्रकार के होते हैं, कम से कम 100 से अधिक, 000 प्रकार। उनकी संरचना, रासायनिक संरचना और रहने की आदतों और अन्य मतभेदों के अनुसार तीन श्रेणियों में विभाजित किया जा सकता है।
यूकेरियोटिक माइक्रोबियल सेल न्यूक्लियस में उच्च स्तर की भिन्नता है, जिसमें परमाणु झिल्ली, न्यूक्लियोलस और क्रोमोसोम शामिल हैं; साइटोप्लाज्म में पूर्ण अंग होते हैं (जैसे एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम, राइबोसोम और माइटोकॉन्ड्रिया, आदि)। कवक इस प्रकार के सूक्ष्मजीव से संबंधित हैं।
प्रोकैरियोटिक माइक्रोबियल कोशिकाओं में कम मात्रा में परमाणु विभेदन होता है, केवल आदिम न्यूक्लियोप्लाज्म, कोई परमाणु झिल्ली और न्यूक्लियोलस नहीं होता है; organelles बहुत पूर्ण नहीं हैं। ऐसे सूक्ष्मजीवों की कई प्रजातियाँ हैं, जिनमें बैक्टीरिया, स्पाइरोकेट्स, माइकोप्लाज़्मा, रिकेट्सिया, क्लैमाइडिया और एक्टिनोमाइसेट्स शामिल हैं।
अकोशिकीय सूक्ष्मजीवों में कोई विशिष्ट कोशिका संरचना नहीं होती है और ऊर्जा उत्पन्न करने के लिए कोई एंजाइम प्रणाली नहीं होती है, और केवल जीवित कोशिकाओं में ही विकसित और पुन: उत्पन्न हो सकते हैं। वायरस इस प्रकार के सूक्ष्मजीव से संबंधित हैं।
सूक्ष्मजीवों का पृथक्करण और शुद्धिकरण
एक से अधिक प्रजातियों वाले माइक्रोबियल कल्चर को मिश्रित कल्चर कहा जाता है। यदि एक कॉलोनी में सभी कोशिकाएं एक पैतृक कोशिका से प्राप्त होती हैं, तो कॉलोनी को शुद्ध संस्कृति कहा जाता है। बैक्टीरिया की प्रजातियों की पहचान में इस्तेमाल किए जाने वाले सूक्ष्मजीवों को आम तौर पर शुद्ध संस्कृतियों की आवश्यकता होती है। शुद्ध संस्कृति प्राप्त करने की प्रक्रिया को पृथक्करण और शुद्धिकरण कहा जाता है और इसकी कई विधियाँ हैं।
1. प्लेट विधि डालें
सबसे पहले, माइक्रोबियल निलंबन को एक श्रृंखला में पतला किया जाता है, और कमजोर पड़ने की एक निश्चित मात्रा को भंग पोषक तत्व अगर माध्यम के साथ पूरी तरह से 40-50 डिग्री पर बनाए रखा जाता है, और फिर मिश्रण को बाँझ पेट्री डिश में डाला जाता है। जमने के बाद, प्लेट को एक स्थिर कक्ष में उल्टा डाला गया। एक एकल कोशिका को एक कॉलोनी बनाने के लिए गुणा किया जाता है, एक एकल कॉलोनी को निलंबन बनाने के लिए लिया जाता है, और शुद्ध संस्कृति प्राप्त करने के लिए उपरोक्त चरणों को कई बार दोहराया जाता है।
2. फ्लैट प्लेट विधि कोटिंग
सबसे पहले, माइक्रोबियल निलंबन को ठीक से पतला किया जाता है, और कमजोर पड़ने की एक निश्चित मात्रा को एक बाँझ पोषक तत्व अगर प्लेट पर रखा जाता है जो जम जाता है, और फिर कमजोर पड़ने को समान रूप से बाँझ कांच के स्पैटुला के साथ माध्यम की सतह पर फैलाया जाता है। एक स्थिर तापमान पर ऊष्मायन द्वारा एक एकल कॉलोनी प्राप्त की जा सकती है।
3. प्लेट स्क्राइबिंग विधि
सूक्ष्मजीवों को अलग करने का सबसे आसान तरीका स्ट्रीकिंग है। एक बाँझ लूप का उपयोग करके प्लेट पर संस्कृति की एक छोटी मात्रा को स्ट्रीक करें। लिखने की कई विधियाँ हैं। सामान्य लेखन विधियाँ जो एकल कॉलोनी दिखाई देने की अधिक संभावना है, वे हैं स्लैश विधि, वक्र विधि, वर्ग विधि, विकिरण विधि और चार-ग्रिड विधि। जब इनोक्यूलेशन लूप माध्यम की सतह पर पीछे की ओर जाता है, तो इनोक्यूलेशन लूप पर बैक्टीरिया का तरल धीरे-धीरे पतला हो जाता है, और अंत में एक एकल कोशिका खींची गई रेखा पर बिखर जाती है। संस्कृति के बाद, प्रत्येक कोशिका एक कॉलोनी में विकसित होती है।
4. संवर्धन संस्कृति विधि
संवर्धन संस्कृति पद्धति की विधि और सिद्धांत बहुत सरल हैं। हम ऐसी स्थितियाँ बना सकते हैं जो केवल वांछित रोगाणुओं को बढ़ने की अनुमति देती हैं, और इन शर्तों के तहत वांछित रोगाणु प्रभावी रूप से अन्य रोगाणुओं के साथ प्रतिस्पर्धा कर सकते हैं और विकास क्षमता के मामले में अन्य रोगाणुओं से कहीं अधिक हो सकते हैं। यदि कुछ बाध्यकारी परजीवियों को अलग किया जाना है, तो नमूनों को बड़ी संख्या में बढ़ने के लिए संबंधित अतिसंवेदनशील मेजबान सेल आबादी में टीका लगाया जाना चाहिए। बार-बार बोने से शुद्ध परजीवी जीवाणु प्राप्त किया जा सकता है।
5. अवायवीय विधि
प्रयोगशाला में, कुछ अवायवीय जीवाणुओं को अलग करने के लिए, मूल माध्यम वाली एक परखनली को संस्कृति पोत के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है, और माध्यम में घुलित ऑक्सीजन को बाहर निकालने के लिए परखनली को उबलते पानी के स्नान में कई मिनट तक गर्म किया जा सकता है। . फिर इसे तेजी से ठंडा करके टीका लगाया जाता है। टीका लगाने के बाद, माध्यम को हवा से अलग करने के लिए बाँझ पैराफिन को माध्यम की सतह पर जोड़ा गया। एक अन्य तरीका यह है कि माध्यम में गैस को टीकाकरण के बाद N2 या CO2 से बदल दिया जाए, और फिर एक लौ पर परखनली के मुंह को सील कर दिया जाए। कभी-कभी कुछ अवायवीय जीवाणुओं को अधिक कुशलता से अलग करने के लिए, पृथक नमूने को माध्यम पर टीका लगाया जा सकता है, और फिर पेट्री डिश को पूरी तरह से सील अवायवीय संस्कृति उपकरण में रखा जा सकता है।
6. एकल कोशिका (या एकल बीजाणु) अलगाव विधि
शुद्ध संस्कृति प्राप्त करने के लिए संस्कृति के लिए मिश्रित आबादी से एकल कोशिकाओं या एकल व्यक्तियों को सीधे अलग करने के लिए माइक्रोसेपरेशन विधि लेना है। बड़े सूक्ष्मजीवों के लिए, एक केशिका का उपयोग करके एक व्यक्ति को निकाला जा सकता है। अपेक्षाकृत छोटे व्यक्तियों के साथ सूक्ष्मजीवों के लिए, शुद्ध संस्कृति प्राप्त करने के लिए माइक्रोस्कोप के तहत एकल माइक्रोबियल कोशिकाओं या बीजाणुओं को केशिका या माइक्रोनीडल, हुक, लूप आदि के साथ लेने के लिए एक माइक्रोमैनिपुलेटर की आवश्यकता होती है। एकल-कोशिका पृथक्करण विधि की ऑपरेशन तकनीक पर अपेक्षाकृत उच्च आवश्यकताएं हैं।
माइक्रोबियल कल्चर
1. संस्कृति के दौरान ऑक्सीजन की आवश्यकता है या नहीं, इसे दो श्रेणियों में विभाजित किया जा सकता है: एरोबिक संस्कृति और अवायवीय संस्कृति।
एरोबिक कल्चर: इसे "एरोबिक कल्चर" के रूप में भी जाना जाता है। कहने का तात्पर्य यह है कि जब इस सूक्ष्मजीव की खेती की जाती है, तो इसमें ऑक्सीजन मिलाने की आवश्यकता होती है, अन्यथा यह अच्छी तरह से विकसित नहीं होगा। प्रयोगशाला में, कपास के प्लग के माध्यम से बाहर से बाँझ हवा प्राप्त करके तिरछी संस्कृतियों को प्राप्त किया जाता है। Erlenmeyer फ्लास्क में अधिकांश तरल कल्चर को शेकर द्वारा हिलाया जाता है, ताकि बाहर की हवा लगातार बोतल में प्रवेश कर सके।
अवायवीय संस्कृति: इसे "अवायवीय संस्कृति" के रूप में भी जाना जाता है। ऐसे सूक्ष्मजीवों को खेती में भाग लेने के लिए ऑक्सीजन की आवश्यकता नहीं होती है। अवायवीय सूक्ष्मजीवों की खेती प्रक्रिया में, सबसे महत्वपूर्ण बिंदु माध्यम में ऑक्सीजन को हटाना है।
2. माध्यम की भौतिक अवस्था के अनुसार, इसे दो श्रेणियों में विभाजित किया जा सकता है: ठोस संस्कृति और तरल संस्कृति।
सॉलिड कल्चर: यह स्ट्रेन को ढीले और पोषक तत्वों से भरपूर ठोस माध्यम में लगाने और उपयुक्त परिस्थितियों में सूक्ष्मजीवों को कल्चर करने की एक विधि है।
लिक्विड कल्चर: प्रयोगों में, लिक्विड कल्चर सूक्ष्मजीवों को तेजी से गुणा कर सकता है और बड़ी संख्या में कल्चर प्राप्त कर सकता है। कुछ शर्तों के तहत, यह बैक्टीरिया को चुनने और समृद्ध करने के लिए सूक्ष्मजीवों के लिए एक प्रभावी तरीका भी है।
बीकेएमएएम बायोटेक माइक्रोबियल कल्चर के लिए संबंधित प्रयोगशाला उपभोग्य वस्तुएं प्रदान करता है:
डिस्पोजेबल प्लास्टिक दौर/स्क्वायर पेट्री डिश:
एल उच्च पारदर्शिता पॉलीस्टाइनिन सामग्री (पीएस);
एल सतह चिकनी और सपाट है, और माइक्रोस्कोप अवलोकन के तहत कोशिकाओं का कोई ऑप्टिकल विरूपण नहीं है;
एल स्टैकिंग डिज़ाइन स्टैकिंग और स्टोरेज को आसान बनाता है;
एल एथिलीन ऑक्साइड नसबंदी (ईओ);
एल पहनें और संक्षारण प्रतिरोध।
डिस्पोजेबल प्लास्टिक इनोक्यूलेशन स्टिक / लूप:
पॉलीस्टाइनिन सामग्री (पीएस);
प्रदूषण रोधी, एंडोटॉक्सिन, DNase, RNase और पाइरोजेन मुक्त;
स्वतंत्र पैकेजिंग को निष्फल कर दिया गया है;
ठीक कारीगरी और पूर्ण विनिर्देश;
डिस्पोजेबल प्लास्टिक सेल स्प्रेडर, बैक्टीरिया स्प्रेडर:
पॉलीस्टाइनिन सामग्री (पीएस);
प्रदूषण रोधी, एंडोटॉक्सिन, DNase, RNase और पाइरोजेन मुक्त;
एल के आकार का डिजाइन, प्रयोग करने में आसान;
एक बार उपयोग, हल्का और सुविधाजनक।
स्टेनलेस स्टील / डिस्पोजेबल बाँझ विशिष्टता प्लेटें:
स्टेनलेस स्टील विनिर्देश प्लेट स्टेनलेस स्टील से बना है, और डिस्पोजेबल विनिर्देश प्लेट खाद्य-ग्रेड पॉलीप्रोपाइलीन (पीपी) से बना है।
प्रदूषण रोधी, एंडोटॉक्सिन, DNase, RNase और पाइरोजेन मुक्त;
धब्बा क्षेत्र सख्ती से मानकीकृत है
विनिर्देश प्लेट के एक तरफ एक हैंडल से लैस है, जो संचालित करना आसान है
नमूने के द्वितीयक संदूषण और परिणामों में त्रुटि से बचने के लिए बाँझ सीलबंद एकल पैकेज
क्रॉस-संदूषण से बचने और वर्कलोड को कम करने के लिए एक बार उपयोग करें
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